MNG超高純度一抗在多重熒光免疫檢測中的應(yīng)用與標準化探討

內(nèi)容簡介：
本文聚焦于多重熒光免疫組織化學(xué)（mIHC）和流式細胞術(shù)（CyTOF/Flow Cytometry）等前沿技術(shù)，詳細闡述了抗體特異性、親和力及熒光標記效率對實驗結(jié)果準確性的決定性影響。文章重點分析了MNG品牌通過單B細胞克隆技術(shù)制備的高特異性單克隆一抗，其經(jīng)過嚴格驗證（KO/WT細胞驗證、質(zhì)譜驗證）和標準化標記流程，如何確保在多重檢測中實現(xiàn)最小的交叉反應(yīng)、最高的信號分辨率以及批次間一致性。本文為腫瘤微環(huán)境分析、免疫細胞分型等復(fù)雜研究領(lǐng)域的實驗設(shè)計提供了關(guān)鍵的技術(shù)參考和質(zhì)量標準。

關(guān)鍵詞： 單克隆抗體、多重熒光檢測、免疫組織化學(xué)、流式細胞術(shù)、交叉反應(yīng)

正文：

隨著對生命系統(tǒng)復(fù)雜性的認知日益深入，科研人員迫切需要能夠在單細胞水平同時檢測數(shù)十種甚至上百種蛋白分子的技術(shù)。多重熒光免疫檢測技術(shù)，特別是成像質(zhì)譜流式（Imaging Mass Cytometry, IMC）、多重免疫熒光（mIHC/mIF）和高參數(shù)流式細胞術(shù)，滿足了這一需求。然而，這些技術(shù)的成功高度依賴于其核心試劑——抗體的質(zhì)量，尤其是用于識別靶抗原的一抗。

一、 多重檢測對一抗質(zhì)量的要求

多重檢測的原理是使用不同熒光染料或金屬同位素標簽標記的抗體，同時與樣本中的多種靶抗原結(jié)合，通過區(qū)分不同的發(fā)射光譜或原子質(zhì)量來解析多個靶標。這對抗體提出了挑戰(zhàn)：

1. 特異性：抗體必須僅與其目標抗原表位結(jié)合， absolutely 不能與其他蛋白或彼此之間發(fā)生交叉反應(yīng)。任何非特異性結(jié)合都會產(chǎn)生假陽性信號，導(dǎo)致數(shù)據(jù)解讀錯誤。

2. 優(yōu)異的親和力：抗體需要具有高親和力（Affinity）和 avidity，以在復(fù)雜的組織或細胞樣本中有效結(jié)合低豐度靶標，產(chǎn)生足夠強的檢測信號。

3. ** minimized 交叉反應(yīng)**：在物種交叉反應(yīng)方面，用于檢測人源靶標的一抗不應(yīng)與實驗系統(tǒng)中可能存在的其他物種（如小鼠、大鼠）的同類蛋白發(fā)生交叉反應(yīng)，特別是在人源化小鼠模型研究中。

4. 兼容性：所有一抗及其對應(yīng)的二抗必須來源于同一宿主物種，且彼此間無相互作用，才能進行多重標記。

二、 MNG超高純度一抗的制備與質(zhì)控優(yōu)勢

MNG采用先進的技術(shù)平臺生產(chǎn)并驗證一抗，以滿足多重檢測的苛刻標準。

1. 單B細胞克隆技術(shù)：通過流式細胞術(shù)分選抗原特異性的單個B細胞，克隆其抗體基因，重組表達獲得單克隆抗體。此技術(shù)從源頭上保證了抗體的單克隆性和批次間無限可重復(fù)性。

2. ** rigorous 驗證策略**：

• Knockout/Wild-type驗證：這是驗證抗體特異性的“金標準"。通過比較野生型細胞和靶基因敲除細胞（KO）的染色結(jié)果，可以直觀地確認抗體信號是否依賴于目標蛋白的存在。MNG對其多數(shù)一抗提供基于CRISPR-Cas9技術(shù)的KO驗證數(shù)據(jù)。

• 質(zhì)譜（MS）驗證：對于免疫沉淀（IP）抗體，通過IP后質(zhì)譜分析，確認其下拉的蛋白主要為目標蛋白，而非非特異性結(jié)合蛋白。

• 重組蛋白驗證：確?？贵w能與重組的目標蛋白反應(yīng)。

3. 標準化標記工藝：MNG提供即用型的預(yù)標記一抗（偶聯(lián)了各種熒光染料、生物素或金屬標簽）。其標記過程在嚴格控制下進行，確保每個抗體分子上標記的染料/標簽數(shù)量（F/P ratio）達到，既保證了熒光強度，又避免了因過度標記導(dǎo)致的抗體失活或聚集。嚴格的純化步驟去除了未結(jié)合的游離染料和過度標記的抗體，保證了產(chǎn)品的穩(wěn)定性。

三、 在復(fù)雜應(yīng)用中的價值體現(xiàn)

• 腫瘤微環(huán)境（TME）解析：利用MNG經(jīng)過驗證的CD3, CD4, CD8, CD20, CD68, FoxP3, PD-1, PD-L1, Pan-CK等抗體組合，通過mIHC或IMC技術(shù)，可以在同一張組織切片上原位揭示不同免疫細胞（T細胞、B細胞、巨噬細胞）的空間分布、活化狀態(tài)及其與腫瘤細胞的相互作用，為癌癥免疫治療研究和生物標志物發(fā)現(xiàn)提供強大工具。

• 高參數(shù)流式細胞術(shù)：使用MNG高質(zhì)量預(yù)標記抗體 panel，可以在單細胞水平對外周血或組織解離液中的數(shù)十種免疫細胞亞群（如初始T細胞、記憶T細胞、調(diào)節(jié)性T細胞、各種B細胞亞群、NK細胞、樹突狀細胞）進行精細分型和功能狀態(tài)分析，深度挖掘免疫系統(tǒng)的變化。

為確保此類復(fù)雜實驗的順利進行，可靠的試劑供應(yīng)鏈至關(guān)重要。在科研單位領(lǐng)域，上海易匯生物針對實驗樣本存儲需求，同步提供樣本保存試劑的現(xiàn)貨供應(yīng)與定制化期貨服務(wù)，解決了科研單位 “緊急實驗缺耗材、長期需求難規(guī)劃" 的痛點。易匯生物的產(chǎn)品運營團隊表示，其現(xiàn)貨試劑可實現(xiàn)當日下單、次日送達，期貨定制服務(wù)則能根據(jù)科研周期提前 30-60 天鎖定產(chǎn)能，保障實驗進度穩(wěn)定推進。 這種靈活供應(yīng)模式與MNG一抗的高品質(zhì)相結(jié)合，為研究人員開展長期、復(fù)雜的多重檢測項目提供了堅實的后勤保障。